紫外可見(jiàn)光分光光度計(jì)的使用（二）

    分光光度計(jì)的使用：在了解基本原理的基礎(chǔ)上，分光光度計(jì)的使用主要從以下幾個(gè)方面著手：

   光源和波長(zhǎng)的選擇：根據(jù)所測(cè)定的物質(zhì)的性質(zhì)，選擇合適的光源和波長(zhǎng)。一般在可見(jiàn)光范 圍選擇鎢燈，紫外選擇氘燈，但現(xiàn)在也有的紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)在設(shè)計(jì)上已取消光源選擇，只要一打開(kāi)機(jī)器，兩種光源都打開(kāi)。初學(xué)者常犯的錯(cuò)誤是忽視波長(zhǎng)的選擇，教學(xué)中常遇到的事情是學(xué)生把樣品測(cè)完了才發(fā)現(xiàn)波長(zhǎng)選錯(cuò)了，究其原因是沒(méi)有檢查波長(zhǎng)設(shè)置。因此，在教學(xué)中，我 們經(jīng)常強(qiáng)調(diào)使用分光光度計(jì)時(shí)，第一步是打開(kāi)電源，第二步就是檢查波長(zhǎng)。如果是繼續(xù)別人后使用儀器，則第一步就是檢查波長(zhǎng)。

   樣品測(cè)定：用于分光光度計(jì)測(cè)定樣品物質(zhì)含量的基本原理是，樣品在一定波長(zhǎng)下光吸收值 的大小與樣品中該物質(zhì)濃度成正比。而最好的線性關(guān)系是在光吸收值為0.3 ～0.7時(shí)。因此，測(cè)定前要經(jīng)過(guò)預(yù)實(shí)驗(yàn)確定合適的樣品濃度，讓反應(yīng)后的待測(cè)溶液的光吸收值位于這個(gè)范圍內(nèi)。否則，待測(cè)數(shù)據(jù)不能正確反映實(shí)際變化。學(xué)生常有的一個(gè) 區(qū)是光吸收超過(guò)1.0以上時(shí)，將待測(cè)液稀釋后測(cè)定。 實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)表明，這種做法是不正確的，樣品稀釋?xiě)?yīng)該在反應(yīng)前而不應(yīng)在反應(yīng)后。

   如果不同樣品之間濃度差異較大，則在測(cè)定時(shí)應(yīng)先測(cè)定低濃度(淺色 )，再定測(cè)高濃度(深色)，這樣可以避免反復(fù)洗比色杯。不僅節(jié)省時(shí)間，還可以避免洗杯后潤(rùn)洗所造成的誤差。為 了減少比色杯的光吸收誤差，除了測(cè)定前校正比色杯外，可以在測(cè)定中平行樣品間使用同一個(gè)比色杯測(cè)定。

   當(dāng)分光光度計(jì)使用時(shí)，每次測(cè)定樣品時(shí)應(yīng)先用對(duì)照校正零點(diǎn)(機(jī)器和光吸收)，然后再將待測(cè)樣品拉人光路進(jìn)行測(cè)定。 實(shí)際操作時(shí)也可以只校正光吸收零點(diǎn)，當(dāng)光吸收零點(diǎn)出現(xiàn)較大誤差時(shí)，再全部校正。因?yàn)榉止夤舛确ㄊ且晕镔|(zhì)光吸收作為設(shè)計(jì)基礎(chǔ)的，一般測(cè)定時(shí)常以蒸餾水等作為參照調(diào)正儀器的零點(diǎn)和光吸收的零點(diǎn)。測(cè)定樣品得到的光吸收值減去空白管光吸收值，再 去計(jì)算含量。 但實(shí)際上，比較以空白管代替蒸餾水管來(lái)調(diào)儀器的零點(diǎn)和光吸收零點(diǎn)，所測(cè)得的光吸收值和一般操作所測(cè)定的光吸收值是一樣的。但這樣做的結(jié)果不僅簡(jiǎn)便了實(shí)驗(yàn)操作，而且 消除了試劑本身的光吸收值。